保持细胞高活力——磁珠法细胞分选_公司新闻

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保持细胞高活力——磁珠法细胞分选

人阅读发布时间：2018-12-20 14:44

细胞分选是根据细胞属性，把一种细胞从多细胞样品中分离出来的方法。细胞分选常见的方法有免疫磁珠分选、流式细胞分选、密度梯度离心、免疫密度离心，其中前两种是最常用的细胞分选方法。那么小狸先简单叨叨这两种方法原理与特点比较。

细胞分选原理：

流式分选一般是电荷式分选，即对感兴趣的目标细胞（荧光染色或标记）所在的液滴充上电荷，液滴经过电极板，通过电场作用发生偏转，从而实现分选。
磁珠分选使用磁珠偶联的抗体去标记细胞，然后把标记好的细胞悬液置于磁场中，带磁珠的细胞就留在试管里，不带磁珠的细胞在上清中，从而实现分选。

流式分选与磁珠分选的比较：

	流式分选	磁珠分选
分选速度	约 10^{^4} cell/s	10^{^7} cell/s
分选纯度	>90%	80-90%
多参数分选	可同时进行多参数分选，例如 CD4+CD25+CD127low 的 Treg，三色的一次就能分选	阳选每次只能根据一个参数，例如 CD3+和 CD4+双阳细胞，必须先分离 CD4，再分离 CD3。亦可进行多种细胞的阴选。
胞内指标分选	可以	不可以
技术难度	需要流式仪，调节仪器参数，技术难度高	不需要专业设备，仅需磁性分离器
对细胞的影响	对细胞刺激大，易污染	对细胞刺激小
所需物品	流失细胞仪标准微粒荧光抗体	磁性分离器磁珠生物素抗体

所以，对于分选细胞数量多或者没有流式仪器再或者需要细胞高活力等的小伙伴们，磁珠分选是大家优选的方法。

做磁珠分选，大家首先要根据自己的实验目的与指标来选择是用阳选、阴选还是复合分选。

阳性分选：运用特异性抗体偶联磁珠直接从细胞混合物中分离目的细胞的分选方法称为 positive selection。阳性分选中磁珠标记的细胞即为目的细胞。该法简单、快速、细胞得率和纯度较高。如采用 anti-CD14 磁珠分选 CD14+巨噬细胞。

阴性分选（也叫去除分选）：用抗体偶联磁珠去除无关细胞，使目的细胞得以纯化和分离的分选方法称为 negative selection。阴性分选中磁珠标记的细胞为非目的细胞。阴性分选法适用于：
①从细胞混合物中去除某种类型细胞。如肿瘤细胞；
②缺乏针对目的细胞筛选的特异性抗体，如肿瘤细胞；
③抗体和目的细胞结合可能诱导细胞活化，影响后续细胞功能分析。

复合分选：将阴性分选和阳性分选相结合的分选方法。复合分选适用于：
①分选非常稀有细胞，可采用阴性分选发先去除其他杂细胞，再采用阳性分选筛选目的细胞；
②非目的细胞也表达用来阳性选择的抗原。
③降低细胞分选的成本，与流失分选联合使用（很多专家正在使用的方法）。

对于磁珠分选方法，小伙伴们普遍用的应该是美天旎或 Thermo 的磁珠分选产品。今天小狸给大家带来大福利，一款性价比更高的细胞分选磁珠——BeaverBeads™ Streptavidin，只用普通的磁性分离架，即可进行细胞分选，细胞去除率可到 80%-90%。

大粒径磁珠分选的实验流程图：

利用 SA 磁珠固定生物素标记的抗体（可根据需要去除细胞种类，选择固定 1 种或多种抗体），室温孵育 15 min，洗涤、重悬后，即可进行后续的细胞分选。

磁珠和细胞投入比例推荐：

50μL 磁珠（10 mg/mL）——2 μg 生物素化抗体——捕获 10^{^6}―10^{^7} 个细胞

产品图片：

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货号	产品名称	规格	包装
22307-1	BeaverBeads™ Streptavidin	1μm,10 mg/mL	1 mL
22307-10	BeaverBeads™ Streptavidin	1μm,10 mg/mL	10 mL
22307-100	BeaverBeads™ Streptavidin	1μm,10 mg/mL	100 mL
22305-1	BeaverBeads™ Streptavidin	2μm,10 mg/mL	1 mL
22305-10	BeaverBeads™ Streptavidin	2μm,10 mg/mL	10 mL
22305-100	BeaverBeads™ Streptavidin	2μm,10 mg/mL	100 mL
60201	Magnetic Separator Stand 2/15		1 个